产 品 名 称 | 通用质粒小量提取试剂盒 General Plasmid Mini Kit |
货 号 | DE-01001 |
规 格 | 50T |
价 格 | ¥181.00 |
描 述 | 快速从转化菌中纯化用于转化、酶切等常规分子生物学实验的高质量质粒DNA。 |
产品介绍
本公司的核酸提取和纯化系列产品可以从多种来源和复杂成分样本中提取纯化到高质量的核酸。DNA系列产品基于DNA-Only硅胶膜纯化柱和独特配方试剂可以从多种样本中纯化得到高质量DNA。
General Plasmid Mini Kit采用DNA-Only纯化柱技术及高效的SDS裂解配方，可以在20分钟内从细菌中获得高质量的质粒DNA。离心柱中采用的DNA-Only硅胶膜为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA，可最大限度的去除RNA、杂质蛋白、离子及细胞中其他有机化合物。DNA-Only纯化柱的质粒DNA最大结合能力为60μg DNA，实际提取获得的质粒DNA量与菌液体积、质粒拷贝数(高拷贝、低拷贝)、菌株、培养条件等因素相关。
试剂盒应用
该试剂盒适用于革兰氏阴性菌的质粒DNA提取纯化。
纯化DNA的应用
通用质粒提取试剂盒纯化获得的质粒DNA纯度高，可用于常规分子生物学操作，如：转化、酶切、PCR、文库构建、转染(传代细胞转染)、测序(建议使用ddH2O洗脱质粒DNA)。
DNA提取得率和纯度
提取的质粒DNA量与细菌培养浓度、拷贝数、菌株、培养条件等因素有关；获得的质粒DNA纯度高，OD260/280=1.7-1.9。
质粒类型 | 培养条件 | 质粒种类 | 得 率 |
低拷贝 | LB、37℃、16hr | pBR322、pACYC及其衍生载体、SuperCos、pWE15、pSC101及其衍生载体 | 1-3μgDNA/ml菌液 |
高拷贝 | LB、37℃、16hr | pcDNA3.1、pBS、pTZ、pGM-T | 5-8μgDNA/ml菌液 |
注：以上数据仅供参考，实际得率和细菌培养条件，培养时间，操作等有关。
试剂盒内容
Buffer S1：提供细菌裂解环境。
Buffer S2：裂解细菌，变性蛋白和DNA。
Buffer S3：沉淀蛋白和基因组DNA，并提供质粒DNA上柱环境。
Buffer PW：去除质粒DNA中的蛋白质、RNA等杂质。
Buffer WB2：去除质粒DNA中的残留的盐离子。
Buffer EB：洗脱纯化柱膜上的质粒DNA。
DNA-Only Column：特异吸附裂解产物中的质粒DNA。
产品信息
型号 | 离心柱型 | 纯化组件 | Foregene离心柱、试剂 |
通量 | 1-24个样品 | 制备时间 | 20 min (24个样品) |
离心机 | 台式离心机 | 细菌裂解物分离 | 离心分离 |
离心柱液体盛装量 | 800 μL | 纯化柱DNA承载量 | 60 μg |
洗脱体积 | 50-200 μL | 细菌处理量 | 1-5 mL |
操作流程
说明书
产品文献
MSDS
COA
低产量或无DNA
Answer
通常有多种因素会影响质粒DNA的产量，包括菌种、质粒、培养条件、操作等等。
1. 培养的细菌没有转化相应的质粒DNA或细菌培养条件不正确。
建议：挑选确定含有转化质粒DNA的细菌进行培养，并确认细菌培养条件。
2. 细菌保存时间过长。细菌在甘油冻存液中保存时间较长，常会出现质粒丢失的现象。
建议：可以重新划平板，挑取含质粒的单菌落或重新转化细菌。
3. 细菌制备时间过长。
建议：使用新制备的细菌提取质粒DNA。
4. Buffer S2出现沉淀。
建议：将Buffer S2置于37℃溶解，混匀后再使用。
5. Buffer WB2没有添加无水乙醇。
建议：确认Buffer WB2中添加正确体积的无水乙醇。
6. 细菌重悬不彻底或者没有进行细菌重悬。
建议：离心收集的菌体在加入Buffer S1后彻底重悬，可以使用移液器反复吹打或涡旋仪彻底打散菌体。采用2mL离心管也有助于细菌重悬。
7. 洗脱液没有正确滴加到硅胶膜上。
建议：将洗脱液滴加到硅胶膜的正中间，并在室温放置2分钟增加洗脱效率。
提取获得低产量质粒DNA
Answer
1. 菌株本身原因。
建议：使用实验室常用大肠杆菌菌株并确认其培养条件。
2. 低拷贝质粒。
建议：适量增加菌液制备量可一定程度上提高低拷贝质粒DNA的提取量。
3. 细菌重悬不彻底。
建议：离心收集的菌体在加入Buffer S1后彻底重悬，可以使用移液器反复吹打或涡旋仪彻底打散菌体。采用2mL离心管也有助于细菌重悬。
4. Buffer S2、Buffer S3析出少量沉淀。
建议：将Buffer S2、Buffer S3置于37℃溶解，混匀后再使用。
5. 细菌保存时间过长。
建议：使用新制备的细菌提取质粒DNA。
6. 洗脱液问题
建议：请使用Buffer EB进行洗脱；如果使用ddH2O或其他洗脱液，确认洗脱液的pH值在7-8.5之间。
7. 洗脱液没有正确滴加
建议：请将洗脱液滴加到硅胶膜的正中间，并在室温放置2分钟增加洗脱效率。
8. 洗脱液体积太少
建议：请按说明书上要求使用洗脱液进行质粒DNA洗脱，最少不要低于50μL。
提取获得质粒DNA纯度低
Answer
1. 质粒DNA污染
a. 分析：细菌培养时间过长或细菌生长过度，部分细菌裂解释放基因组DNA，并降解。
建议：细菌培养时间控制在16-20hr。
b. 分析：加入BufferS2后剧烈震荡。
建议：加入Buffer S2后轻柔混匀。不可剧烈震荡或使用涡旋仪。
c. 分析：裂解时间过长
建议：Buffer S2加入后立即混匀，裂解时间不要超过5分钟。
2. 杂蛋白污染、内毒素污染、RNA污染
分析：在加入Buffer S3离心后，过柱上清液中含有细小的沉淀；没有使用Buffer PW洗涤纯化柱；Buffer PW洗涤纯化柱没有使用正确的离心转速。
建议：尽量使用实验室常见菌株，如DH5α、JM109、Top10等；在上清液过柱时尽量保证上清液中无沉淀；务必按说明书规定的离心转速(900 ×g)进行Buffer PW洗涤纯化柱，并且此步骤不能省略。
3. 杂质离子污染
分析：省略了Buffer WB2洗涤纯化柱或者只洗涤了一次，导致残留的离子污染。
建议：务必按说明书使用Buffer WB2洗涤2次，以尽量去除残留的离子。
4. RNA酶污染
分析：Buffer S1中添加了外源的RNA酶；Buffer PW洗涤操作不正确，导致RNA酶残留，影响下游RNA实验操作，如：体外转录等。
建议：Foregene系列质粒提取试剂盒无需额外添加RNA酶即可去除RNA， Plasmid Mini Kit里面所有试剂均无需添加RNA酶；务必按说明书规定的离心转速(900 ×g)进行Buffer PW洗涤纯化柱，并且此步骤不能省略。
5. 乙醇残留
分析：Buffer WB2洗涤纯化柱后，没有进行空管离心操作。
建议：按说明书进行正确的空管离心操作。
6. 其他质粒DNA污染
分析：在琼脂糖凝胶电泳出现目的质粒DNA外的其他质粒条带，可能是转化质粒菌株被其他杂菌污染。
建议：尽量挑取单克隆细菌进行培养；细菌接种时在无菌环境中进行。
