产 品 名 称 | 口腔拭子/血卡基因组DNA提取试剂盒 Buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit |
货 号 | DE-05811 |
规 格 | 50T |
价 格 | ¥557.00 |
描 述 | 快速从口腔拭子、血斑等样本中纯化获得高质量的基因组DNA，试剂盒包含Foregene纯化柱及试剂。 |
产品介绍
本试剂盒提供了高效、快速从口腔拭子、FTA Card(血斑)中纯化得到较高浓度基因组DNA的方法。采用本公司特有的DNA-only硅胶膜离心柱和配方，搭配Foregene Protease，可以在80分钟提取到较高浓度、高质量的基因组DNA。专门设计的微小纯化柱结合基因组DNA，可用微量(15 μL)洗脱体系洗脱DNA，提高获得的基因组DNA的浓度，便于下游检测或实验。试剂盒一次可处理一个或多个样品，且纯化过程不需要用到酚、氯仿等有机物抽提以及耗时的异丙醇或乙醇沉淀，操作简捷省时。
本试剂盒离心柱采用的DNA-only硅胶膜为本公司特有新型材料，高效、特异吸附DNA，可最大限度的去除RNA、杂质蛋白、离子及细胞中其他有机化合物。获得的DNA片段大，纯度高、质量稳定可靠，一个离心柱的最大承载量为80 μg DNA。获得的DNA可用于酶切、PCR、Southern杂交、文库构建等分子生物学实验。
试剂盒应用
该试剂盒适用于纯化以下样本基因组DNA：口腔拭子、FTA Card(血斑)。
纯化DNA的应用
口腔拭子/血卡基因组DNA提取试剂盒纯化获得的基因组DNA纯度高，可用于常规分子生物学操作，如：酶切、PCR、Southern杂交、文库构建等实验。
DNA提取得率和纯度
微量样本基因组DNA的产量与样本来源、保存条件、酶解程度以及操作有关，口腔拭子/血卡基因组DNA提取试剂盒提供了一种有效的获得微量样本基因组DNA的方法，一般一个口腔拭子可获得0.5-3 μg的基因组DNA(与口腔拭子上含有的细胞数量有关)；一个直径为3mm的血斑可获得0.2-0.5 μg的基因组DNA。获得的基因组DNA纯度高，其OD260/280≈1.7-1.9。
试剂盒内容
Buffer ST1：提供组织样本酶解环境。
ForegeneProtease：在Buffer ST1的环境下酶解组织样本。
Buffer ST2：失活Foregene Protease，并提供DNA上柱环境。
Linear Acrylamide：减少核酸本底吸附，提高DNA洗脱效率。
Buffer PW：去除DNA中的蛋白质、RNA等杂质。
Buffer WB：去除DNA中的残留的盐离子。
Buffer EB：洗脱纯化柱膜上的DNA。
DNA-Only Column：特异吸附裂解产物中的基因组DNA。
产品信息
型号 | 离心柱型 | 纯化组件 | Foregene离心柱、试剂 |
通量 | 1-24个样品 | 制备时间 | 80 min (24个样品) |
离心机 | 台式离心机 | 组织酶解物分离 | 离心分离 |
纯化柱DNA承载量 | 30 μg | 离心柱液体盛装量 | 800 μL |
洗脱体积 | 15-30 μL | 样本处理量 | 1根口腔拭子 1-3片直径3mm血斑 |
操作流程
说明书
产品文献
MSDS
COA
纯化柱堵塞
Answer
本试剂盒在基因组DNA提取操作步骤中，样本酶解后没有离心步骤直接将样本酶解混合物上纯化柱吸附DNA，有可能由于酶解不完全、样本粘稠高等因素导致纯化柱堵塞。
可能存在的原因如下：
1. 组织样本酶解不完全。
建议：可适当延长Foregene Protease处理样本时间或者以12,000rpm (~13,400 ×g)离心5min后取上清液过柱。
2. 组织样本用量过多或者组织较大。
建议：样本最好不要超过1根口腔拭子；如果样本过多请相应增加Buffer ST1、Foregene Protease、Buffer ST2的用量。
3. 样本粘稠度过高。
建议：可将样本用10mM的Tris-HCl适当稀释后再进行基因组DNA的提取操作。
4. 吸取到了血卡的碎片。
建议：可适当延长血斑(FTA Card)基因组提取第6步短暂离心时间。
提取过程中无法获得基因组DNA可能存在的原因如下
Answer
通常有多种因素会影响基因组DNA产量，包括样本来源、样本保存条件、样本的预处理、操作等。
可能存在的原因如下：
1. 样本保存不当或保存时间太长，导致基因组DNA降解。
建议：口腔拭子最好是新鲜取样，不宜使用保存的拭子进行基因组DNA提取操作；血斑样本确保质量合格，保存时间不宜过长。
2. 组织用量过少可能导致提取不到相应的基因组DNA。
建议：按照操作指南里面的口腔拭子取样说明进行操作，尽量多擦拭几次以便口腔拭子上能附着足够的细胞进行基因组DNA提取；对于血斑样本提取，可适当增加血斑剪取面积。
3. ForegeneProtease保存不当，导致其活性降低或失活。
建议：确认Foregene Protease保存条件或者更换新的Foregene Protease进行酶解反应。
4. 试剂盒保存不当或存放时间太长，导致试剂盒里面某些组分失效。
建议：购置新的口腔拭子基因组DNA提取试剂盒进行相关操作。
5. Buffer WB没有添加无水乙醇。
建议：确认Buffer WB中添加正确体积的无水乙醇。
6. 洗脱液没有正确滴加到硅胶膜上。
建议：将65℃预热的洗脱液滴加到硅胶膜的正中间，并在室温放置5分钟增加洗脱效率。
提取获得低产量基因组DNA
Answer
可能存在的原因如下：
1. 样本保存不当或保存时间太长，导致基因组DNA降解。
建议：口腔拭子最好是新鲜取样，不宜使用保存的拭子进行基因组DNA提取操作。
2. 组织样本用量过少，提取到的基因组DNA含量会较少。
建议：按照操作指南里面的口腔拭子取样说明进行操作，尽量多擦拭几次以便口腔拭子上能附着足够的细胞进行基因组DNA提取。
3. ForegeneProtease保存不当，导致其活性降低或失活。
建议：确认Foregene Protease保存条件或者更换新的Foregene Protease进行酶解反应。
4. 洗脱液问题。
建议：请使用Buffer EB进行洗脱；如果使用ddH2O或其他洗脱液，确认洗脱液的pH值在7.0-8.5之间。
5. 洗脱液没有正确滴加。
建议：请将洗脱液滴加到硅胶膜的正中间，并在室温放置5分钟增加洗脱效率。
6. 洗脱液体积太少。
建议：请按说明书上要求使用洗脱液进行基因组DNA洗脱，最少不要低于15 μL。
提取获得基因组DNA纯度低
Answer
基因组DNA纯度低会导致下游实验的失败或效果不理想，如：酶切不开，PCR得不到目的基因片段等。
可能存在的原因如下：
1. 杂蛋白污染、RNA污染。
分析：没有使用Buffer PW洗涤纯化柱；Buffer PW洗涤纯化柱没有使用正确的离心转速。
建议：在添加乙醇之前保证上清液中无沉淀；务必按说明书进行Buffer PW洗涤纯化柱，并且此步骤不能省略。
2. 杂质离子污染。
分析：省略了Buffer WB洗涤纯化柱或者只洗涤了一次，导致残留的离子污染。
建议：务必按说明书使用Buffer WB洗涤2次，以尽量去除残留的离子。
3. RNA酶污染。
分析：Buffer中添加了外源的RNA酶；BufferPW洗涤操作不正确，导致RNA酶残留，影响下游RNA实验操作，如：体外转录等。
建议：Foregene系列核酸提取试剂盒无需额外添加RNA酶即可去除RNA，Buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit里面所有试剂均无需添加RNA酶；务必按说明书进行Buffer PW洗涤纯化柱，并且此步骤不能省略。
4. 乙醇残留。
分析：Buffer WB洗涤纯化柱后，没有进行空管离心操作。
建议：按说明书进行正确的空管离心操作。
5. 其他杂质污染。
分析：保存样本或特殊样本没有进行预处理。
建议：按操作说明对样本进行彻底的预处理。
